本发明属于聚明胶肽注射液的制备工艺，具体涉及一种以牛骨、猪骨或其他明胶为原料生产血浆代用品聚明胶肽注射液的制备方法。

　　聚明胶肽是近年来新一代改良明胶，自从用于临床后，发现它具备理想的人工胶体条件，比右旋糖酐和羟乙基淀粉更具优越性。因为聚明胶肽各项指标与人体血液相近，电解质含量及pH值更接近人体血浆，而右旋糖酐和羟乙基淀粉无此特性；聚明胶肽对凝血系统无干扰，右旋糖酐和羟乙基淀粉都具有抗凝血作用，而受到剂量限制；聚明胶肽与右旋糖酐和羟乙基淀粉相比略有过敏反应，而且短暂轻微；聚明胶肽还可更好地改善循环功能，表现在血液稀释后，机体的心输出量、氧运送、心指数及平均动脉压增加，而右旋糖酐和羟乙基淀粉在这方面的功能较差。许多研究表明，聚明胶肽对急性血容量不足的补充、血液稀释等方面具有良好的效果，所以被较多地应用于血液稀释和自身输血。

　　聚明胶肽注射液是世界卫生组织(WH0)《基本药物指南》推荐的明胶类血浆代用品，具有提升血压、迅速补充维持血容量与维持渗透压的作用。临床使用中具有人血所不具备的优势，如输血时无须血型匹配，可避免输血造成的肝炎、爱滋病等疾病的交叉传染等，适于临床急救。

　　但目前聚明胶肽注射液存在不同的制备方法，如公开号为CN1387912A和公开号为CN1586620A的“聚明胶肽注射液的制备方法”中均用到了交联剂乙二醛、丁二酸酐、戊二醛等。其中乙二醛吸入、摄入或经皮肤吸收后对人体可能有害。其蒸气或烟雾对眼睛、皮肤、粘膜和上呼吸道有刺激作用。属中等毒性物质，对眼和鼻粘膜有轻微刺激作用，可引起动物剧吐。慢性中毒可引起胰腺损害。急性毒性LD502020mg/kg(大鼠经口)；200mg/kg(小鼠腹腔)。虽然戊二醛对皮肤与粘膜的刺激性较乙二醛小，但对人体组织具有中等毒性可引起支气管炎及肺水肿。戊二醛致变态反应通常不发生于首次，经潜伏期，再接触后从数分钟至72h即可发生过敏反应的各种症状。若在制备过程中有乙二醛、戊二醛等残留的话可能导致制备出来的聚明胶肽注射液在临床应用时引发多种不良反应。而按本发明方法制备聚明胶肽注射液无需加入任何交联剂，在临床应用时更安全。

　　本发明的目的在于提供一种聚明胶肽注射液及其制备方法。按本发明方法制备的聚明胶肽注射液符合国家药品标准，具有提升血压、迅速补充维持血容量与维持渗透压的作用。且生产工艺简单可控，易工业化大生产，不加任何交联剂，生产合格率高，易控制产品质量。

　　更具体地说，本发明的主要特点是采用常规的方法水解，使水解易于控制，无需特殊设备，易于大生产；不加任何交联剂，完全避免交联剂残留而对机体产生的毒副作用；直接控制水解条件使得到的聚明胶肽的重均分子量在35000～39000道尔顿之间；在精滤过程中除去分子量小的部分聚明胶肽，使得到的聚明胶肽分子量分布更集中；采用注射液常用的灭菌方法在121℃灭菌，使聚明胶肽的重均分子量再一次降低至30000～35000道尔顿左右，符合国家标准规定的重均分子量27500～39500的范围。

　　本发明聚明胶肽注射液制备工艺具体步骤为1、明胶水解取明胶置适宜容器中，加注射用水适量，搅拌使溶解，加酸适量水解。

　　2、加入pH值调节剂水解完毕后加入适量的pH值调节剂调节pH值为6.5～7.5。

　　3、加入电解质再称取适量的氯化钠、氯化钙、氯化钾，使电解质完全溶解，再补加注射用水至处方量。

　　4、吸附澄清加入适量的针用活性炭，搅拌吸附热原、杂质等，用中速砂滤棒脱炭。药液循环20分钟。

　　更具体说，本发明的方法包括以下步骤1、明胶水解取明胶置适宜容器中，用40～70℃的注射用水使明胶溶解，取盐酸、硫酸或其它无机酸，其浓度应为0.1％～2.0％(WN)，优选浓度为0.5％～1.0％(WN)，加入已溶解的明胶溶液中，搅拌均匀，密封，于90～121℃条件下水解，优选温度为90～108℃，控制水解时间为30分钟～100分钟之间，优选时间为60分钟～80分钟。最终使水解得到的聚明胶肽的重均分子量在35000～39000道尔顿之间为佳。

　　2、加入pH值调节剂水解完毕后加入适量的pH值调节剂，pH值调节剂可以是氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠等，也可以是上述各项的混合物，调节明胶水解后溶液的pH值为6.5～7.5之间。

　　3、加入电解质再称取适量的氯化钠、氯化钙、氯化钾加入上述步骤2所得的溶液中，加入电解质的量应符合聚明胶肽注射液国家药品标准的要求，即每1ml注射液中含钾应为2.0～4.0μmol，钠应为139～152μmol，钙应为0.2～2.0μmol，搅拌使电解质完全溶解，再补加注射用水至处方量。

　　4、吸附澄清加入针用活性炭置上述混合溶液中，活性炭用量为0.01～2.0％(W/V)，优选用量为0.05～1.0％(W/V)，搅拌吸附热原、杂质等，搅拌时间优选为20分钟～30分钟，搅拌温度优选为50～60℃。用中速砂滤棒脱炭。药液循环20分钟。

　　上述方法生产包装的聚明胶肽注射液的规格可以是每500ml药液含3.2g氮(聚明胶肽以含氮量计)，也可以是250ml药液含1.6g氮(聚明胶肽以含氮量计)。

　　本发明中聚明胶肽注射液制备的突出特点是制备方法简单，不加任何交联剂，易控制反应条件，易工业化大生产，临床应用更安全。

　　我们根据《中国药典》2000年版二部附录中对注射剂检验的一般要求，并参考聚明胶肽的原质量标准[标准号WS1-XG-011-2002]，为控制该品质量进行了质量研究工作及方法学的考察，主要包括性状，鉴别，检查(pH值、钾、钠、钙、氯、游离氨基、重均分子量、重金属、不溶性微粒、热原、无菌、过敏试验)、含量测定等。制定的质量标准如下聚明胶肽注射液Jumingjiaotai ZhusheyePolygeline Injection本品为健康牛骨或猪骨明胶水解制成的灭菌水溶液，含聚明胶肽以含氮(N)计，应为标示量的90.0～110.0％。

　　鉴别取本品适量，用水制成每1ml中含2mg的溶液，取2ml加12.5％的硫酸铜溶液0.05ml，混匀，再加8.5％氢氧化钠溶液0.5ml，溶液应显紫色或紫红色。

　　检查pH值应为6.5～7.5(《中国药典》2000年版二部附录VIH)。

　　钾、钠、钙 天顺注册标准溶液的制备标准溶液制备 按下表精密量取各离子标准溶液稀释

　　分别按上表取用各标准稀释液，置100ml量瓶中(其中钾的标准溶液系列中分别加入盐酸2ml)，用去离子水稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液，则标准溶液的浓度系列为

　　供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置50ml高型石英烧杯中，加去离子水5ml及硝酸-高氯酸(4∶1)12ml，加热消化至溶液澄清，放冷，用去离子水稀释至刻度，作为供试品溶液储备液。

　　精密量取供试品溶液储备液2ml，置50ml量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，作为测定钾的供试品溶液。精密量取上述钾的供试品溶液10ml，置100ml量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，作为测定钠的供试品溶液；取储备液作为测定钙的供试品溶液。

　　测定法取上述对照品溶液及各供试品溶液，照原子吸收分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVD第一法)，分别在589.0nm，766.0nm，和422.7nm的长处测定钠、钾、钙的吸收度，计算每1ml中含钾应为2.0～4.0μmol，钠应为139～152μmol，钙应为0.2～2.0μmol。

　　游离氨基精密量取本品40ml，置100ml锥形瓶中，加2mol/L的盐酸溶液1.6ml，搅拌并恒温至20℃，用氢氧化钠滴定液(0.2mol/L)滴定至pH为6.0，记录消耗氢氧化钠滴定液的量(M1)。继续用氢氧化钠滴定液滴定使pH值为9.0，加甲醛溶液(取甲醛溶液用氢氧化钠试液调节pH值至7.0±0.02)4.0ml，放置约30秒后继续滴定使pH值至8.5，记录消耗氢氧化钠滴定液的量(M2)，按下式计算滴定值。

　　滴定值(每40ml供试品消耗1mol/L氢氧化钠滴定液的毫升数)＝(M2-M1)×F/5式中，F为氢氧化钠滴定液(0.2mol/L)的校正因子。

　　重均分子量(Mw)照多糖的分子量与分子量分布测定法(中国药典2000年二部附录VH)测定。用凝胶色谱柱(TSK-G3000PWXL7.8mm×300mm)，以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾7.0g，二水合磷酸氢二钠16.2g，叠氮化钠0.8g，加水4000ml混匀)为流动相，流速为每分钟0.5ml，柱温35℃，示差折光检测器。

　　称取5个已知分子量的右旋糖酐分子量对照品与其相应的保留时间计算回归方程。取本品20ml，加流动相至50ml，作为供试品溶液，同法测定，记录分子量分布曲线，并通过软件计算。重均分子量应为27500～39500。

　　重金属 精密量取本品10ml，依法检查，(中国药典2000年版附录VIIIH，第二法)，含重金属不得过百万分之一。

　　不溶性微粒 取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录IXC显微计数法)，应符合规定。

　　热原 取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录XID)，计量按家兔体重每1kg注射10ml，应符合规定。

　　无菌 取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录XIH薄膜过滤法)，应符合规定。

　　本法系将一定剂量的供试品溶液注入豚鼠腹腔和静脉，在规定的时间内观察动物的过敏反应情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。

　　供试动物 健康豚鼠，雌雄均可，体重250～350g，试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养，做过本试验的动物不得重复使用。

　　供试溶液的配制 除另有规定外，用氯化钠注射液按各药品项下规定浓度制成供试品溶液。

　　检查法 取上述豚鼠6只，间日腹腔注射供试品溶液0.5ml，连续3次，然后分成两组，每组3只，分别在第一次注射后第14日以及第21日静脉注射供试品1.0ml。

　　结果判定 静脉注射后15分钟内均不得出现过敏性反应，如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽3声等现象中的两种以上者；或啰音、抽搐、虚脱或死亡现象之一者应为判定为阳性。

　　其他 应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版二部附录IB)测定。

　　含量测定 取本品，照氮含量测定法(中国药典2000年版二部附录VIID)测定。

　　过敏反应按上述质量标准，对本发明方法研制的聚明胶肽注射液三批样品进行质量检查，结果如下聚明胶肽注射液三批样品检验结果

　　同时我们对这三批聚明胶肽注射液，按照《中国药典》2000年版二部附录的有关规定，进行了稳定性研究，具体如下1、加速试验取本品，按市售包装，在温度为40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置。在试验期间分别于第0、1、2、3、6个月末取样一次，结果表明本品在加速试验考察条件下放置6个月，各项指标均符合规定。

　　2、长期试验取本品，按市售包装，在温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置36个月。分别于第3、6、9、12、18、24、36个月末取样一次，结果表明本品在长期试验考察条件下放置24个月，各项指标均符合规定。

　　3、加速和长期试验中的热原和无菌检查在加速第6个月和长期6、12、18、24个月，对本品进行了无菌、热原及不溶性微粒的检查，结果均符合规定。

　　以上试验结果表明，本发明方法研制的聚明胶肽注射液在加速试验、长期试验条件下基本稳定。

　　综上所述，本发明方法研制的聚明胶肽注射液制剂工艺简单易行，适于工业化生产，所制定的质量标准基本可控制产品质量。

　　实施例11、取明胶180g置适宜容器中，加70℃注射用水约4000ml，搅拌使明胶溶解，加盐酸20ml搅拌均匀后将混合溶液置90℃恒温水解70分钟。

　　3、再称取30g氯化钠、0.5g氯化钙、1g氯化钾加入上述水解后的溶液中，补加注射用水至5000ml。

　　4、加入1.0％(g/ml)的针用活性炭，60℃保温30分钟，用中速砂滤棒脱炭。药液循环20分钟。

　　实施例21、取明胶200g置适宜容器中，加50℃注射用水约3000ml，搅拌使明胶溶解，加10％的硫酸溶液100ml搅拌均匀后将混合溶液置100℃恒温水解60分钟。

　　3、再称取33g氯化钠、0.56g氯化钙、1.1g氯化钾加入上述水解后的溶液中，补加注射用水至5000ml。

　　4、入0.5％(g/ml)的针用活性炭，70℃保温20分钟，用中速砂滤棒脱炭。药液循环20分钟。

　　实施例31、取明胶200g置适宜容器中，加40℃注射用水约4200ml，搅拌使明胶溶解，加5％盐酸200ml搅拌均匀后将混合溶液置121℃恒温高压水解30分钟。

　　3、再称取33g氯化钠、0.56g氯化钙、1.1g氯化钾加入上述水解后的溶液中，补加注射用水至5000ml。

　　4、加入0.01(g/ml)的针用活性炭，50℃保温40分钟，用中速砂滤棒脱炭。药液循环20分钟。

　　1.聚明胶肽注射液的制备工艺，其特征工艺步骤为A.明胶水解取明胶置适宜容器中，加注射用水适量(约为处方量的60％至90％之间)，搅拌使溶解，加酸适量水解。B.加入pH值调节剂水解完毕后加入适量的pH值调节剂调节pH值为6.5～7.5。c.加入电解质再称取适量的氯化钠、氯化钙、氯化钾，使电解质完全溶解，再补加注射用水至处方量。D.吸附澄清加入适量的针用活性炭，搅拌吸附热原、杂质等，用中速砂滤棒脱炭。药液循环20分钟。E.精滤。F.分装，加塞，轧盖。G.灭菌。H.全检、包装。

　　2.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤A中，溶解明胶所用注射用水的温度为40～70℃。

　　3.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤A中，明胶水解时的温度为90～121℃，优选温度为90～108℃。

　　4.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤A中，明胶水解时间为30分钟～100分钟，优选时间为60分钟～80分钟。

　　5.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤A中，所用酸为盐酸、硫酸或其它无机酸，其浓度为0.1％～2.0％(W/V)，优选浓度为0.5％～1.0％(W/V)。

　　6.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤B中，所用pH值调节剂可以是氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠等，也可以是上述各项的混合物。

　　7.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤D中，所用针用活性炭的用量为0.01～2.0％(W/V)，优选用量为0.05～1.0％(W/V)。

　　8.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤D中，搅拌时间为10分钟～70分钟，优选为20分钟～30分钟。

　　9.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤D中，搅拌温度为20～80℃，优选为50～60℃。

　　10.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤G中，灭菌温度为121℃。

　　11.如权利要求1的聚明胶肽注射液的制备方法，其特征在于，步骤G中，灭菌时间为15分钟～50分钟，优选为20分钟～30分钟。

　　本发明公开了一种聚明胶肽注射液的制备工艺。该方法包括A.明胶水解取明胶置适宜容器中，加注射用水适量，搅拌使溶解，加酸适量水解。B.加入pH值调节剂水解完毕后加入适量的pH值调节剂调节pH值为6.5～7.5。C.加入电解质再称取适量的氯化钠、氯化钙、氯化钾，使电解质完全溶解，再补加注射用水至全量。D.吸附澄清加入适量的针用活性炭，搅拌吸附热原、杂质等，用中速砂滤棒脱炭。药液循环20分钟。E.精滤。F.分装，加塞，轧盖。G.灭菌。H.全检、包装。按本发明方法制备的聚明胶肽注射液符合国家药品标准，且生产工艺简单可控，易工业化大生产，不加任何交联剂，生产合格率高，易控制产品质量。

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